Institut für allgemeine Pharmakologie & Toxikologie -
Prof. Dr. J. Pfeilschifter

Expertise

Krebs:

Grundlegende Kenntnis Virus-assoziierter Tumoren (EBV, HPV) als Modellsysteme für die Entwicklung tumorspezifischer Therapieansätze
Identifizierung von Tumorsuppressor-Regionen und genetischen Läsionen mittels Monochromosomen-transfer, Mikrosatellitenpolymorphismen-Analyse und SSCP-Analyse
Verbesserung von Strategien zur Krebsbehandlung: Screening für Synergismen bei der Kombination individueller Therapieformen (prodrug converting-Systeme zur Erhöhung der Strahlenempfindlichkeit: Verwendung spezifischer Virostatika)
Design und Evaluierung von tumorspezifischen Gentherapievektoren (basierend auf Adeno-, Retro- oder Herpesviren, präsent als artefizielle Minichromosomen; Design von Expressionskassetten,die von viralen Transkriptionsfaktoren gesteuert werden oder Promotoren aberrant exprimierter Gene enthalten; Exploration des therapeutischen Potentials von Suizidgenen, pro-apoptotischen und Tumorsuppressor-genen)
Ánalgetika (NSAIDs) für die Krebstherapie, Entwicklung lokaler tumorspezifischer Applikationsverfahren für diese Substanzen zur Reduktion gefährlicher Nebenwirkungen
Tumorigenitätstests an immundefizienten Mausstämmen; Rekultivierung von Tumormaterial in vitro

Entzündung:

Weit reichendes Verständnis der molekularen Mechanismen von Entzündungen der Niere und der Haut
Erforschung der Entzündungsprozesse während der Regeneration von Geweben: Wundheilung in der Haut als Modellsystem; Einfluss von Stickstoffmonoxid, Diabetes Typ II, Leptin, pharmakologische Interventionsmöglichkeiten bei Heilungsprozessen; Biologie der Keratinozyten
Die extrazelluläre Matrix (ECM) als Target während der Entzündung: Regulation von ECM-abbauenden Enzymen (Matrix-Metalloproteinasen (MMPs), (endogene) Plasminogenaktivatoren (PAs); Untersuchung der RNA-Stabilität als posttranskriptioneller Mechanismus zur Regulation der Genexpression
Kulturen von menschlichem Vollblut und von aus Blut frisch isolierten peripheren mononukleären Zellen: ein etabliertes Modellsystem für die Evaluierung der Produktion pro- und anti-entzündlicher Zytokine in vitro
Menschliche Colonkarzinomzellen als Modell zur Erforschung von Mechanismen der pro-entzündlichen und pro-apoptotischen Aktivierung
Untersuchung von Lokalisation und Funktion von Phospholipase A2-Subtypen in gesunder Haut und in der Haut von Patienten mit allergischen oder Autommunerkrankungen (Phospholipase A2-Aktivitäts-Assays (zytosolische und sekretorische Subformen) in vitro und an intakten Zellen)

Signal Transduction:

Analyse von Lipidmediatoren (radioaktiv, GC-MS, EIA)
Lipidanalyse mittels TLC
Detektion von PKC Isoenzym-vermittelten zellulären Funktionen (Mesangiumzellen als Modellsystem; in vitro PKC Isoenzym-Aktivitätsassays)
Quantifizierung von Tetrahydrobiopterin
Quantifizierung von Sphingolipiden (u. a. in humanem Gewebe) und Identifizierung von Signalkaskaden, an denen sie beteiligt sind
· Identifizierung von Stickstoffmonoxid-regulierten Genen: Analyse differentieller Genexpression auf RNA (RAP-PCR)- und Proteinlevel

Methoden und Geräte

Klonierung, DNA-Sequenzierung, Transformation / Transfektion, Infektion unter Verwendung viraler Vektoren
Zellsorting mittels FACS
Virusproduktion und –aufkonzentrierung durch Ultrazentrifugation
Immunhistochemie
- Immunzytochemie
- Immunfluoreszenz an Gewebeschnitten (Haut, Niere)
Konfokale Lasermikroskopie
Luziferase-Assays (Promotoranalyse, Analyse von mRNA stabilisierenden Sequenzelementen durch Einklonieren von 3´ UTRs in Reportergene)
Electrophoretic mobility shift assays: DNA-/ RNA-Protein-Interaktionen
Site-directed mutagenesis (funktionelle Analyse definierter cis-regulatorischer Promotorelemente)
In vitro RNA-Degradierungsassay (mRNA Stabilitätsmessungen)
Gelatin-Zymografie (semiquantitative Messungen von MMP-2- / MMP-9-Aktivitäten in Zellkultur-überständen)
Differenzielle Genexpressionsanalyse mittels 2D-Gelelectrophorese und differential display (RAP-PCR)
In-vitro-Modelle:
- Glomeruläre Mesangiumzellen, MCF-7-Mammakarzinomzellen
- Kulturen von menschlichem Vollblut und von aus Blut frisch isolierten peripheren   mononukleären Zellen
- Menschliche Burkittlymphomlinien als Modell für Virus-assoziierte Tumoren
- Primäre Mauskeratinozyten: Isolierung und Kultivierung aus neonatalen Mäusen;   mononukleäre Zellen
- Menschliche Kolonkarzinomzellen: Mechanismen pro-inflammatorischer und pro   apoptotischer Aktivierung
- Kultivierung primärer humaner Keratinozyten; Zellinien etabliert aus   Keratinozytentumoren
Tiermodelle:
- C57BL/6, BALB/c, db/db, ob/ob, transgene Mäuse
- Nackt- und SCID-Mäuse

Publikationen

Westphal EM, Ge J, Catchpole JR, Ford M and Kenney SC: The nitroreductase / CB1954 combination in Epstein-Barr virus-positive B-cell lines: induction of bystander killing in vitro and in vivo. Cancer Gene Ther 7: 97-106, 2000.
Westphal EM, Blackstock W, Feng W, Israel B and Kenney SC: Activation of lytic Epstein-Barr virus infection by radiation and sodium butyrate in vitro and in vivo :
a potential method for treating EBV-positive malignancies. Cancer Res 60: 5781-5788, 2000.
Feng WH, Westphal E, Mauser A, Raab-Traub N, Gulley ML, Busson P, Kenney SC: Use of adenovirus vectors expressing Epstein-Barr virus (EBV) immediate-early protein BZLF1 or BRLF1 to treat EBV-positive tumors. J Virol 76(21): 10951-9, 2002.
Akool E.S., Kleinert H., Hamada F.M.A., Abdelwahab M.H., Förstermann U., Pfeilschifter J, and Eberhardt W.: Nitric oxide increases the decay of MMP-9 mRNA by inhibiting the expression of mRNA stabilizing factor HuR. Mol. Cell. Biol. 23(14): 4901-4916, 2003.
Eberhardt W., Schulze M., Engels C., Klasmeier E. and Pfeilschifter J.: Glucocorticoid-mediated suppression of cytokine-induced matrix metalloproteinase-9 expression in rat mesangial cells: involvement of NF-kB and Ets transcription factors. Mol. Endocrinol. 16: 1752-1766, 2002.
Eberhardt W., Beck K.-F., Huwiler A., Walpen S., Pfeilschifter J.: Amplification of interleukin-1b-triggered MMP-9 expression in rat mesangial cells by superoxide is mediated by increased activity of NF-kB and AP-1 and involves activation of the MAPKs pathways. J. Immunol.165: 5788-5797, 2000.
Frank S, Stallmeyer B, Kämpfer H, Kolb, N, Pfeilschifter J: Leptin enhances wound re-epithelialization and constitutes a direct function of leptin in skin repair. J Clin Invest 106:501-509, 2000
Goren I, Kämpfer H, Podda M, Pfeilschifter J, Frank S: Leptin and wound inflammation in diabetic ob/ob mice: differential regulation of neutrophil and macrophage influx and a potential role for the scab as a sink for inflammatory cells and mediators. Diabetes 52:2821-2832, 2003
Kämpfer H, Bräutigam L, Geisslinger G, Pfeilschifter J, Frank S: Cyclooxygenase-1-coupled prostaglandin biosynthesis constitutes an essential prerequisite for skin repair.J Invest Dermatol 120:880-890, 2003
Hellmuth M, Wetzler C, Nold M, Chang J-H, Frank S, Pfeilschifter J, Mühl H.: Expression of Interleukin-8, Heme Oxygenase-1, and Vascular Endothelial Growth Factor in DLD-1 Colon Carcinoma Cells Exposed to Pyrrolidine Dithiocarbamate. Carcinogenesis 23: 1273-1279, 2002.
Nold M, Hauser IA, Höfler S, Goede A, Eberhardt W, Ditting T, Geiger H, Pfeilschifter J, Mühl H.: IL-18BPa:Fc cooperates with immunosuppressive drugs in human whole blood. Biochem Pharmacol 66: 501-506, 2003.
Mühl H, Höfler S, Pfeilschifter J.: Inhibition of lipoplysaccharide/ATP-induced release of interleukin-18 by KN-62 and Glyburide. Eur J Pharmacol 482: 325-328, 2003.
Walpen S, Beck KF, Schaefer L, Raslik I, Eberhardt W, Schaefer RM, Pfeilschifter J: Nitric oxide induces MIP-2 transcription in rat renal mesangial cells and in a rat model of glomerulonephritis. FASEB J. 15: 571-573, 2001
Schaefer L, Beck KF, Raslik I, Walpen S, Mihalik D, Micegova M, Macakova K, Schonherr E, Seidler DG, Varga G, Schaefer RM, Kresse H, and Pfeilschifter J.: Biglycan, a nitric oxide-regulated gene, affects adhesion, growth and survival of mesangial cells. J Biol Chem 278: 26227-26237, 2003
Franzen R, Pautz A, Bräutigam L, Geisslinger G, Pfeilschifter J, Huwiler A.: Interleukin 1beta induces chronic activation and de novo synthesis of neutral ceramidase in renal mesangial cells.
J Biol Chem 276: 35382-35389, 2001

Mitarbeiter:

Dr. K.-F. Beck (Genexpression in Abhängigkeit von Stickstoffmonoxid)
PD Dr. W. Eberhardt (Extrazelluläre Matrix, Entzündung)
PD Dr. S. Frank (Entzündung, Wundheilung, Diabetes)
PD Dr. A. Huwiler (Signaltransduktion, Sphingolipide, Sphingosinkinasen)
PD Dr. M. Kaszkin (Phospholipase A2, Analyse aktiver Substanzen)
PD Dr. H. Mühl (Analyse aktiver Substanzen, Signaltransduktion, Entzündung)
Dr. E.-M. Westphal (Gentherapie; prodrug converting-Enzyme und nichtsteroidale anti-inflammatorische Substanzen (NSAIDs) in der Krebsbehandlung)